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siRNA转染试剂的选择
227 人阅读发布时间：2022-04-08 10:30
RNA干扰（RNA interference，RNAi）是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。它是指小分子双链RNA可以特异性地降解同源mRNA,从而抑制或关闭特定基因表达的现象。人们只要知道了某种疾病的致病基因，就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA（Small interfering RNA，siRNA），抑制或封闭该致病基因的表达，从而达到治疗疾病的目的。siRNA是目前最为热门的生命科学研究领域，也是未来最有发展前途的新药开发领域。除此之外，siRNA技术还可以广泛应用于农业、林业、畜牧业和渔业等多种领域，进行良种培育、良种筛选和疾病治疗等。
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。其中，化学转染技术是目前最为常用的方法，由于电转的方法对细胞损伤比较大，一般不建议选择电转。化学转染能否成功的关键在于转染试剂的选择。如何选择合适的转染试剂，一般可从以下几个方面考虑：
一、对siRNA有较高的转染效率
转染效率的确定，常用的是使用荧光定量PCR、荧光显微镜和流式细胞仪检测的方法。金标准无疑是检测目标基因的mRNA水平，因为转染试剂不仅要把siRNA转染进入细胞，还应及时把转入细胞的siRNA释放出来，发挥抑制基因表达的作用。通过荧光显微镜判断转染效率至少存在两方面的问题：1、荧光显微镜看到的荧光点可能是非特异吸附的结果；2、有些转染试剂能够将siRNA转染入细胞，但不能充分释放，导致基因抑制效率并不高。因而，判断转染试剂转染效率的金标准应该是荧光定量检测mRNA水平，仅靠观察荧光显微镜判断转染效率、选择转染试剂往往会导致误判，影响实验的进展。
二、对转染细胞的毒性很小
转染试剂如果毒性过大，会导致大量细胞死亡，这会直接影响对转染试验结果的判读和解析。脂质体类转染试剂本身会导致某些基因的表达改变，因而会影响转染试验结果的客观性。以上可见，应尽量选择毒性小的转染试剂。有些研究者对细胞毒性不太重视，仅仅考虑是否可将siRNA转染进入细胞，其结果在某些高水平的期刊，往往会导致审评的质疑。
三、转染细胞的种类
目前常见的转染试剂主要转染对象为贴壁培养细胞，对悬浮细胞和原代细胞的转染效率都不是非常理想。
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。其中，化学转染技术是目前最为常用的方法，由于电转的方法对细胞损伤比较大，一般不建议选择电转。化学转染能否成功的关键在于转染试剂的选择。如何选择合适的转染试剂，一般可从以下几个方面考虑：
一、对siRNA有较高的转染效率
转染效率的确定，常用的是使用荧光定量PCR、荧光显微镜和流式细胞仪检测的方法。金标准无疑是检测目标基因的mRNA水平，因为转染试剂不仅要把siRNA转染进入细胞，还应及时把转入细胞的siRNA释放出来，发挥抑制基因表达的作用。通过荧光显微镜判断转染效率至少存在两方面的问题：1、荧光显微镜看到的荧光点可能是非特异吸附的结果；2、有些转染试剂能够将siRNA转染入细胞，但不能充分释放，导致基因抑制效率并不高。因而，判断转染试剂转染效率的金标准应该是荧光定量检测mRNA水平，仅靠观察荧光显微镜判断转染效率、选择转染试剂往往会导致误判，影响实验的进展。
二、对转染细胞的毒性很小
转染试剂如果毒性过大，会导致大量细胞死亡，这会直接影响对转染试验结果的判读和解析。脂质体类转染试剂本身会导致某些基因的表达改变，因而会影响转染试验结果的客观性。以上可见，应尽量选择毒性小的转染试剂。有些研究者对细胞毒性不太重视，仅仅考虑是否可将siRNA转染进入细胞，其结果在某些高水平的期刊，往往会导致审评的质疑。
三、转染细胞的种类
目前常见的转染试剂主要转染对象为贴壁培养细胞，对悬浮细胞和原代细胞的转染效率都不是非常理想。
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