Elabscience免疫组化检测试剂盒无染色的解决方案

140 人阅读发布时间：2024-08-15 16:39

一、Elabscience免疫组化简介

免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)是利用抗原-抗体相互作用显示组织切片中抗原分布和定位的一种方法。
IHC常用于诊断癌症等疾病中的异常细胞和组织。总体而言，IHC提供了有价值的观点和支持，使其他方法获得的数据更加有据可依。
IHC染色依赖于识别靶蛋白的抗体，可以通过两种检测方法对抗原-抗体的相互作用进行可视化，一种是显色方法(酶偶联抗体催化底物显色，产生有色沉淀)；另一种是荧光检测法(荧光基团偶联抗体产生荧光)。
二、Elabscience免疫组化检测试剂盒列表

货号	产品名称	规格
E-IR-R217	2-step plus Poly-HRP Anti Mouse/Rabbit IgG Detection System (with DAB solution)	3ml/6ml/18ml
E-IR-R213	2-step plus Poly-HRP Anti Rabbit/Mouse IgG Detection System（with DAB Solution）	3ml/6ml/18ml
E-IR-R221	Super PlusTM High Sensitive and Rapid Immunohistochemical Kit (pH6.0)	3ml/10ml

三、Elabscience免疫组化检测试剂盒无染色的解决方案

实验步骤	原因	优化方案
靶标和样本特性	检测组织中不存在目的蛋白。	设置文献中或抗体供应商推荐的阳性对照。
	组织中目标蛋白丰度不够。	采用信号放大步骤，将信号最大化。例如，使用生
	透化作用破坏了细胞膜(如果靶标蛋白是膜蛋白)。	使用不那么强烈的去垢剂(例如，用Tween 20代替Triton X),或者直接从缓冲液中去除通透剂。
	蛋白位于核内，如果切片很厚，使抗体不能进入细胞核。	向封闭缓冲液和抗体稀释缓冲液中加入强透化剂，例如：Triton X。参见我们的透化技术实验方案。
样本固定	固定过程(使用福尔马林和多聚甲醛固定剂)可能改变了抗体识别的表位。	使用不同的抗原修复方法来暴露抗原表位(包括使用pH值为6.0或9.0的缓冲液进行热抗原修复、酶抗原修复等)。
样本固定	固定过程(使用福尔马林和多聚甲醛固定剂)可能改变了抗体识别的表位。	缩短固定时间。
脱蜡	脱蜡可能不充分。	延长切片的脱蜡时间，使用新配制的二甲苯。
抗体孵育	一抗和二抗不兼容。	使用抗一抗种属来源的二抗(例如，如果一抗是兔来源的，则使用抗兔的二抗)。确认二抗是否识别一抗的亚型。
	没有足够的一抗与目的蛋白结合	使用更高浓度的抗体。
	没有足够的一抗与目的蛋白结合	4℃下长时间孵育(如过夜孵育)。
	抗体可能不适用于IHC,因为其可能无法识别蛋白的天然(3D)形式。	查看抗体使用说明书，确认抗体是否经过IHC验证以及验证的IHC类型(福尔马林或PFA固定、冰冻切片等)。
	抗体可能不适用于IHC,因为其可能无法识别蛋白的天然(3D)形式。	在天然(非变性)WB中检测抗体，以确保其仍然有效。
	一抗/二抗可能因储存不当、稀释不当或多次反复冻融而失去活性。	设置阳性对照，以确保一抗、二抗的有效性。
	二抗未避光保存(进行荧光检测时)。	始终防止二抗暴露在光下。
	抗体不能穿透蛋白所定位的细胞核(核蛋白)。	向封闭缓冲液和抗体稀释液中加入强效通透剂(如TritonTMX-100)。
	透化作用破坏了膜，去除了膜蛋白(膜蛋白)。	使用更温和的表面活性剂(例如，使用Tween 20代替TritonTMX-100)。
缓冲液	PBS缓冲液被细菌污染。	从缓冲液中去除通透剂。
检测	信号放大试剂盒可能因储存不当、稀释不当或多次反复冻融而失去活性。	在PBS抗体储存缓冲液中加入0.01%叠氮化物或使用新配制的无菌PBS。
检测	信号放大试剂盒可能因储存不当、稀释不当或多次反复冻融而失去活性。	设置阳性对照，以确保这些试剂仍然有效。

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