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技术资料/正文
聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测
192 人阅读发布时间：2022-04-01 16:29
实验方法原理：与琼脂糖凝胶不同，聚丙烯酰胺凝胶灌制时不能加入溴化乙锭，因为此染料会影响丙烯酰胺的聚合。然而，电泳后可用溴化乙锭进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。由于聚 丙烯酰胺会猝灭溴化乙锭的荧光，所以检测 DNA 的灵敏度降低。电泳后也可用核酸染料SYBR Gold ( Molecular Probes) 进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。它也不能在聚合过程中掺入到凝胶中，这样会妨碍 DNA 的迁移并使 DNA 条带变形。亚甲蓝染色检测的灵敏度低，但较之前两种染料价格低廉，也可选用。
试剂、试剂盒：溴化乙锭溶液 SYBR Gold 贮存液或亚甲蓝贮存液
仪器、耗材：聚丙烯酰胺凝胶
实验步骤：
一、材料
1. 缓冲液和溶液
染料溶液：溴化乙锭溶液（贮存液 0.5 μg/ml ), SYBR Gold 贮存液或亚甲蓝贮存液（0.001%~0.0025%, TAE 缓冲液配制）
2. 凝胶
聚丙烯酰胺凝胶
二、方法
1. 将凝胶及其附着的玻璃板轻轻地浸入需用染色液中，染色液正好将凝胶没住即可。室温染色 30~45 min。
2. 以玻璃板为支撑物将凝胶从染色液中取出，水冲洗后用一叠 Kimwipes 纸巾蘸去凝胶表面多余的液体。
3. 用一张 Saran Warp 膜覆盖在凝胶上，用梳子宽的一端或折叠的 Kimwipe 纸巾除去 Saran Wrap 膜中的气泡或皱褶。
4. 在紫外透射光源上放一张 Saran Wrap 膜，将凝胶倒置，放在透射光源上，移去玻璃板，凝胶便留在 Saran Wrap 膜上。
5. 凝胶摄影参见方案“琼脂糖凝胶中 DNA 的检测”。
试剂、试剂盒：溴化乙锭溶液 SYBR Gold 贮存液或亚甲蓝贮存液
仪器、耗材：聚丙烯酰胺凝胶
实验步骤：
一、材料
1. 缓冲液和溶液
染料溶液：溴化乙锭溶液（贮存液 0.5 μg/ml ), SYBR Gold 贮存液或亚甲蓝贮存液（0.001%~0.0025%, TAE 缓冲液配制）
2. 凝胶
聚丙烯酰胺凝胶
二、方法
1. 将凝胶及其附着的玻璃板轻轻地浸入需用染色液中，染色液正好将凝胶没住即可。室温染色 30~45 min。
2. 以玻璃板为支撑物将凝胶从染色液中取出，水冲洗后用一叠 Kimwipes 纸巾蘸去凝胶表面多余的液体。
3. 用一张 Saran Warp 膜覆盖在凝胶上，用梳子宽的一端或折叠的 Kimwipe 纸巾除去 Saran Wrap 膜中的气泡或皱褶。
4. 在紫外透射光源上放一张 Saran Wrap 膜，将凝胶倒置，放在透射光源上，移去玻璃板，凝胶便留在 Saran Wrap 膜上。
5. 凝胶摄影参见方案“琼脂糖凝胶中 DNA 的检测”。