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技术资料/正文
质粒的提取和制备
335 人阅读发布时间：2022-04-01 17:35
溶液配制
（一）LB培养基
每1000 ml加分析纯NaCl 10 g，蛋白胨10 g，酵母粉5 g，用ddH2O配制，再用10 M NaOH调pH至7.4（100 ml一般加450 μl），高温高压蒸汽灭菌15 min冷却后使用。
固体培养基加入琼脂1.5%。
10 M（或N）NaOH配制方法是称200 g NaOH加300 ml，搅拌充分溶解后定容至500 ml。
（二）溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
溶液Ⅰ：葡萄糖50 mmol/L，EDTA 10 mmol/L，Tris-HCl 25 mmol/L，pH至8.0。可一次配制100 ml，在1.05 kg/cm2高温高压蒸汽灭菌15 min，4℃保存。
溶液Ⅱ：NaOH 0.2 mol/L（从10 N NaOH中现用稀释），SDS 1%，用现配现用。
溶液Ⅲ：取5 mol/L乙酸钾 60 ml，冰乙酸11.5 ml，混合后ddH2O至100 ml。保存于4℃，用时置于冰浴中。
1 M Tris-HCl（pH 7.5）配制方法：Tris（MW 12.1）12.1 g 加浓HCl（MW 36.5）72 ml，调节pH到7.5并定容到1000 ml。1 M Tris-HCl（pH 8.0）配制方法：12.1 g Tris加800 ml ddH2O，用HCl（~42 ml）调pH到8.0。等溶液在室温下冷却，最后调节pH到8.0并定容到1000 ml。高温高压蒸汽灭菌。
（三）酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）
按25:24:1的比例混匀平衡酚、氯仿、异戊醇，保存于棕色玻璃瓶中，上覆一层Tris-Cl水相，4℃保存备用。酚-氯仿-异戊醇混合物在100 mmol/L Tris-Cl（pH 8.0）缓冲液下在不透光的瓶中可保存一个月之久。
（四）TE（pH 8.0）
10 mM Tris-HCl（pH 8.0），1 mM EDTA（pH 8.0），加ddH2O至1000 ml。高温高压蒸汽灭菌。或用100×TE母液稀释。
（五）STE
10 mM Tris-HCl（pH 8.0），0.1 M NaOH，1 mM EDTA（pH 8.0），加ddH2O至1000 ml。高温高压蒸汽灭菌。
（一）LB培养基
每1000 ml加分析纯NaCl 10 g，蛋白胨10 g，酵母粉5 g，用ddH2O配制，再用10 M NaOH调pH至7.4（100 ml一般加450 μl），高温高压蒸汽灭菌15 min冷却后使用。
固体培养基加入琼脂1.5%。
10 M（或N）NaOH配制方法是称200 g NaOH加300 ml，搅拌充分溶解后定容至500 ml。
（二）溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
溶液Ⅰ：葡萄糖50 mmol/L，EDTA 10 mmol/L，Tris-HCl 25 mmol/L，pH至8.0。可一次配制100 ml，在1.05 kg/cm2高温高压蒸汽灭菌15 min，4℃保存。
溶液Ⅱ：NaOH 0.2 mol/L（从10 N NaOH中现用稀释），SDS 1%，用现配现用。
溶液Ⅲ：取5 mol/L乙酸钾 60 ml，冰乙酸11.5 ml，混合后ddH2O至100 ml。保存于4℃，用时置于冰浴中。
1 M Tris-HCl（pH 7.5）配制方法：Tris（MW 12.1）12.1 g 加浓HCl（MW 36.5）72 ml，调节pH到7.5并定容到1000 ml。1 M Tris-HCl（pH 8.0）配制方法：12.1 g Tris加800 ml ddH2O，用HCl（~42 ml）调pH到8.0。等溶液在室温下冷却，最后调节pH到8.0并定容到1000 ml。高温高压蒸汽灭菌。
（三）酚-氯仿-异戊醇（25:24:1）
按25:24:1的比例混匀平衡酚、氯仿、异戊醇，保存于棕色玻璃瓶中，上覆一层Tris-Cl水相，4℃保存备用。酚-氯仿-异戊醇混合物在100 mmol/L Tris-Cl（pH 8.0）缓冲液下在不透光的瓶中可保存一个月之久。
（四）TE（pH 8.0）
10 mM Tris-HCl（pH 8.0），1 mM EDTA（pH 8.0），加ddH2O至1000 ml。高温高压蒸汽灭菌。或用100×TE母液稀释。
（五）STE
10 mM Tris-HCl（pH 8.0），0.1 M NaOH，1 mM EDTA（pH 8.0），加ddH2O至1000 ml。高温高压蒸汽灭菌。