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技术资料/正文
真菌总RNA的提取
316 人阅读发布时间：2022-04-02 13:31
实验材料：酚 氯仿 异戊醇 12mol L 氯化锂 3mol /L 乙酸钠 乙醇 DEPC 处理的水
仪器、耗材：水浴 低温高速离心机
实验步骤：
仪器、耗材：水浴 低温高速离心机
实验步骤：
- 在装有液氮的研钵中研磨 2〜5 g 真菌组织，直至完全变成粉末。
2. 把研磨好的粉末转移到 Falcon 管中，管中装有提取缓冲液 (每克真菌用 3 mL 提取缓冲液）及等体积酚：氯仿：异戊醇 (预热到 65℃）
3. 振摇试管以彻底混合。
4. 把混合物转移到一个无 RNase 的离心管中，以 13000〜18000 g 于 4℃ 离心30 min
5. 收集上层水相，加入等体积的氯仿：异戊醇 (24:1)，翻转混匀。
6. 以 1300〜18000 g 于 4°C 离心 30 min。
7. 收集上层水相，加入 12mol/L 氯化锂至终浓度髙于 2mol/L。
8. 混合后于 4℃ 过夜以沉淀 RNA,
9. 以 13000〜18000 g 于 4℃ 离心 30 min
10. 去上淸，以 5 ml3mol/L 乙酸钠 (pH5.2) 清洗沉淀，按第 9) 步离心 15 min
11. 去上清. 以 20 ml70% 乙醇清洗沉淀，再按第 9) 步离心 I5 min。
12. 用 70% 乙醇重复冼涤一次。
13. 真空干燥以去除乙醇，
14. 以适当体积（250〜lOOOul)DEPC 处理的水溶解沉淀。
15. 溶解的 RNA 于-70°C 保存。