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荧光定量 PCR 平台期，有or没有？
447 人阅读发布时间：2022-04-02 15:28
荧光定量 PCR 实验中，童靴们会问是不是需要跑到平台期？如果没有平台期，是不是试剂不行？或者是扩增出现了问题？增加 PCR 循环数达到平台期，能不能行？没有对比就没有伤害，下面的对比实验会说明平台期到底是否会影响定量结果，又有哪些因素会影响到扩增曲线的平台期呢？
下图1是一组 6 个梯度稀释的标准品，扩增曲线指数期之后是线性扩增期，从图上看，没有出现明显的平台期。这样的结果能否得到理想的标准曲线用于定量分析呢？
定量 PCR 的数学原理中指出，荧光定量 PCR 是在扩增曲线的指数期内划定阈值线，取阈值线与扩增曲线的交点所得到的 Ct 值（图 2）进行定量分析。之前的实验证明：96 次重复实验（图 3）说明 PCR 反应的终产物即平台期的荧光信号差异较大，重复性差，从而导致定量不准确，所以不适合用于定量分析。而指数期内荧光信号重复性好，所以用这个阶段的数据可以对靶标基因进行准确定量。另外，从指数期开始，试剂有剩余，DNA 聚合酶 的高效性强，产物量少。因此能提高数据的准确度。
下图1是一组 6 个梯度稀释的标准品，扩增曲线指数期之后是线性扩增期，从图上看，没有出现明显的平台期。这样的结果能否得到理想的标准曲线用于定量分析呢？
定量 PCR 的数学原理中指出，荧光定量 PCR 是在扩增曲线的指数期内划定阈值线，取阈值线与扩增曲线的交点所得到的 Ct 值（图 2）进行定量分析。之前的实验证明：96 次重复实验（图 3）说明 PCR 反应的终产物即平台期的荧光信号差异较大，重复性差，从而导致定量不准确，所以不适合用于定量分析。而指数期内荧光信号重复性好，所以用这个阶段的数据可以对靶标基因进行准确定量。另外，从指数期开始，试剂有剩余，DNA 聚合酶 的高效性强，产物量少。因此能提高数据的准确度。
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