一文弄懂细胞迁移实验

一、细胞迁移

1.细胞迁移 (cell migration) 也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。细胞迁移实验是研究细胞在体外条件下移动能力的一种实验方法，广泛应用于细胞生物学、肿瘤学和免疫学等领域。细胞迁移实验基于细胞对环境变化的反应能力，这些变化可以是物理的（如空间间隙）或化学的（如梯度差）。实验目的是模拟并观察细胞如何在这些条件变化下移动，从而了解细胞迁移的机制和影响因素。

2. 图示

 

 

1、细胞划痕实验

 

以下是细胞迁移实验的基本步骤：

1）在适当的培养皿中培养细胞至约80-90%汇合。

2）用无菌移液枪头或划痕工具在细胞单层上划出一道划痕，模拟伤口。轻轻清洗培养皿以去除浮动细胞。

3）添加新的培养基，可以根据实验需要添加不同的处理物质（如药物、细胞因子等）。

4）使用显微镜观察并拍摄划痕后的即时图像（0小时）。将培养皿放回培养箱。

5）定期（如6小时、12小时、24小时等）取出培养皿，观察并拍摄细胞迁移的图像。

6）使用图像分析软件（如ImageJ）测量不同时间点划痕的宽度或迁移的细胞数。计算细胞迁移率并进行统计分析。

7）汇总实验数据，绘制细胞迁移曲线图。

结果图展示

 

 

2、Transwell迁移实验

 

以下是基本步骤

1）在24孔板中放置Transwell插入物。向每个Transwell上室添加适量无血清培养基（通常为100-200 µL），向下室添加含有化学诱导剂的培养基（通常为600-800 µL）。

2）用无菌PBS清洗培养的细胞。使用胰酶消化细胞，并加入含有无血清培养基的管中中止消化。计数细胞，并调整细胞悬液至适当浓度（例如1×10⁵ cells/mL）。

3）向Transwell上室中添加适量的细胞悬液（通常为100-200 µL）。小心处理以避免气泡形成。

4）将Transwell板放入37°C、5% CO2培养箱中孵育24-48小时，以允许细胞迁移。

5）孵育结束后，取出Transwell插入物。

6）用无菌PBS轻轻清洗上室，去除未迁移的细胞。

7）用固定液（如甲醇或4%多聚甲醛）固定下室迁移的细胞，固定时间通常为10-15分钟。

8）用PBS清洗并染色（如0.1%结晶紫染色或DAPI染色）。

9）用棉签擦去上室膜上的未迁移细胞。使用显微镜观察下室膜上的迁移细胞，并拍摄图像。计数多个视野中的迁移细胞数，计算平均值。

10）汇总迁移细胞数量，进行统计分析，绘制细胞迁移图。

 

结果图展示